慢病毒包装

相关知识：

在有关转染的研究中，为了感染原代细胞和难感染的细胞系，研究者借助于病毒载体实现。由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。而在RNAi研究需要长期观察或者需要进行动物实验时，基于慢病毒构建的shRNA的优势更为明显。

实验流程：

1）根据目的基因相关信息（序列，序列号等），对每条目的设计3条siRNA序列，其中一条序列为阴性对照组；

2）根据设计好的siRNA序列，设计，合成两条互补的短片段的DNA；

3）对合成好的DNA片段进行稀释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；

4）通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结果；

5）对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒；

6）利用构建好的质粒做转染实验，48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因，筛选出一条最有效的siRNA序列；

7）筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；

8）浓缩、纯化病毒液，测定滴度。

慢病毒包装流程

您只需提供：

靶基因信息。

我们提供：

慢病毒包装实验报告单，提供1*108TU/ml病毒（1 ml），对照病毒（200 μl）等。