稳定转染    

相关知识：

稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系，这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说（由细胞类型决定），形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的毕竟中分离出稀少的稳定转染物。

实验流程：

1）常规细胞：

a. 杀伤曲线绘制；

b. 转染质粒，铺板，用不同的抗生素浓度筛选细胞单克隆；

c. qPCR或Western Blot检测稳定克隆的外源基因表达水平。

2）特殊细胞：

a. 根据细胞特点、实验特点或实验需求，设计实验方案并与客户探讨确定实验方案；

b. 预实验，通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂，并优化转染条件；

c. 杀伤曲线绘制；

d. 转染质粒，铺板，用不同的抗生素浓度筛选细胞单克隆；

e. qPCR或Western Blot检测稳定克隆的外源基因表达水平。