实时荧光定量PCR实验  RT-PCR
 

背景知识：

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。1996年，美国Applied Biosystems公司推出了一种新定量试验技术——实时荧光定量PCR，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。

技术原理：

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

样品准备条件：

细胞样品：收集细胞后放入液氮中速冻保存或速冻24 h后转入-80 °C冰箱保存；收集细胞后，视细胞量，直接加入1-1.5 mL Trizol溶解裂解细胞，再转入-80 °C冰箱保存。

组织样品：动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存，液氮冻存24 h后可转入-80 °C冰箱保存；组织样品同样可以采用Trizol溶解裂解后放入-80 °C冰箱保存。特殊组织（植物等）建议采用新鲜组织即刻提取RNA，逆转合成cDNA后-20 °C保存备用。

所有样品的处理和保存过程中，切忌反复冻融。

样品运输条件：

样品运输条件根据实验样品的处理条件，可以选择液氮或者干冰运输。
您只需提供：

新鲜且足量的样品（组织不少于50 mg，细胞不少于106），或纯化好的符合实验要求的总RNA或cDNA（≥ 5 μg），检测的基因信息，相关文献等。

我们提供：

免费设计引物/探针，实验报告单，qRT-PCR原始数据，扩增曲线，溶解曲线，数据分析结果等。

重要意义与应用：

无论是对遗传疫病（如地中海贫血和血友病）、感染性疾病（如细菌、HBV、HPV、EBV、CMV、TB、支原体和衣原体等）以及肿瘤进行基因诊断，还是研究药物对基因表达水平的影响，或者监控药物和疗法的治疗效果，以及对食品及环境中菌群种类（如食品中污染的沙门氏菌）的检测，实时荧光定量PCR技术都可以发挥很大的作用。